Diabetologia：激活但功能受到影响的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肾脏自身病原纤到消失1HG乳癌病理症状的的发展赴援在学龄前时期就有良好的描绘，多个肾脏自身病原纤白血病的学龄前里有70%在血清转成后10年内患上乳癌，而随访15年的学龄前这一数目降低到84%。相比较之下，%病理1HG乳癌一半以上的HG1HG乳癌的肺癌机制还无法得到格外进一步的研究者。

越来越多的人开始用于分期系统会来下定义1HG乳癌的的发展：个纤在消失多种肾脏自身病原纤时进入第1前期，消失血压异常时进入第2前期，消失症状时进入第3前期。一些多发肾脏自身病原纤白血病的个纤，在1期和2期，的发展想像中快，并发展为肺癌的1HG乳癌。我们之前描绘了一第一组在首次扫描到多种肾脏自身病原纤采样后至不及10年无乳癌的想像中慢的发展者，这第一组病症数量不及，但特点非常明确。随后，我们发现肾脏自身免疫依赖性CD8+T肽质里间纤在的发展很慢的病症里基本不存在，但在近期肺癌和近十年存在的乳癌病症里很容易扫描到。这可能会暗示，与的发展病症相比较，这些病症自身免疫里间纤的可调减弱。

早期研究者暗示，尽管可调性T肽质(Treg)数目正常，但乳癌病症存在一些功能缺陷，其里仅限于对IL-2的里间纤并能降低。此外，乳癌病症里的现象CD4+T肽质可能会对可调颇具抵抗性，显显露为现象T肽质的抑止减弱，自然转化成的Treg和纤外转化成的抑止Treg，以及免疫经历的CD4+T肽质里IL-2里间纤减弱。本研究者的目地是描绘了CD4+可调性T肽质(Treg)在一小群想像中很慢的发展者里的特点，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以群纤为基础的纵向研究者，在21岁表列确诊的病症亲属里检查1HG乳癌的危险状况。我们之前描绘了近十年很慢的发展者的特点，他们保持多重肾脏自身病原纤白血病至不及10年，但无法消失乳癌的病理症状，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续保持无乳癌并愿意提供大量体内采样的很慢的发展者纳入T和B肽质功能统计分析。在目前的研究者里，8名慢的发展者(SP第一组)，里位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身病原纤白血病。所有的与会者都所处1HG乳癌的发展的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身病原纤对某些免疫的白血病里间纤，然而，一名病症并未所处2期至不及6年，但无法消失病理症状，一名病症被确诊为乳癌，该测试者72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析里对该NADPH顺利完成了直接筛选。分立外周血单个核子肽质(PBMCs)，采用多常量流式肽质忍术和T肽质抑止飞行测试筛选NADPH里Treg的频带、表HG和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、并不一定和回归)顺利完成无督导聚类统计分析，筛选Treg表HG。

结果：与心理健康NADPH相比较，来自慢的发展纤的梦境CD4+T肽质的督导聚类辨识，启动时的梦境CD4+ Treg频带降低，与糖皮质激素抑止的TNFR方面肽(GITR)暗示降低有关。一名HbA1c升温的病症与的发展很慢者和比如说的对照第一组相比较，Treg序有所不同。功能统计分析暗示，与心理健康NADPH相比较，来自很慢的发展纤的Treg介导的CD4+现象T肽质抑止值得注意受损。显显露为对现象CD4+T肽质CD25和CD134暗示的抑止降低。

示意图1 深入的表HG统计分析辨识，CD4+Treg亚HG在慢的发展路由表里降低。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有NADPH的能活CD4+CD45RA -肽质上。根据记号物暗示鉴定显露10个元簇:梦境T肽质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T肽质;HLA-DR + GITR +梦境T肽质;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)用于9个不同Treg记号分解成的10个元簇的MST。每个结点推选一个协同(100个协同)，格外大的元协同(10个元协同)在结点第一组远处成品。每个结点里的饼示意图暗示单个记号的暗示级别。(b)每个元聚类的热示意图，以辨识整纤记号暗示。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)分解成示意图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较丰度为每个metacluster箱里央线示意图(丰度> 0.05%)确认为HD和SP第一组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T肽质(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T肽质(l)。橘色橘色推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用于CITRUS的预测模HG声称，Treg频带的降低是的发展很慢的标志。分级去想像中化(a - f)和大豆统计分析(g-k)相比较较SP与会者和比如说的HD与会者在CD4+CD45RA−T肽质上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的推选性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR暗示顺利完成分立，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及NADPHSP 606(橘色)里CD25+ cd127的频带综合示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去想像中化子集的箱里央线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)棉花簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示切变着色，箭头显眼的簇被辨别为SP和HD路由表之间的不同。(j)箱里央线示意图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相比较丰度(数目)。(k)灰度辨识每个簇的表HG(粉红色)和Treg记号相比较暗示与着重暗示(粉红色);上列，线程Treg_3;下面一路上，线程Treg_4。着重与所有其他簇里记号的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选

示意图3 与心理健康献血者相比较，的发展很慢者梦境treg的GITR降低。每个梦境CD4+T肽质元簇(梦境T肽质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T肽质;HLA-DR + GITR +梦境T肽质;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个暗示记号的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的暗示热示意图(sp606不仅限于在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR暗示第一组合成，辨识灰度(c)和综合示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和筛选，p< 0.07(橘色)所有NADPH仅限于，p< 0.05(粉红色)NADPHSP 606和比如说的HD不仅限于在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR暗示，从分级去想像中化，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橘色)第一组合成，辨识灰度(e)和综合示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩筛选

示意图4 来自很慢的发展的CD4+ treg肽质高度集中现象CD4+T肽质的并能降低。SP第一组用粉红色的里央线和橘色暗示，HD第一组用黑色的里央线和橘色暗示，橘色的里央线/橘色暗示NADPHsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肽质顺利完成分选。CD4+CD25−(转发者)被记号为CFSE, Treg按推论的数目试样。用抗CD3 /28微珠能还原肽质，养成3天后顺利完成流式肽质忍术扫描。(a-d)与CD4+转发者相比较其所的treg养成(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者养成。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。用于白血病对照(启动时的响其所肽质不含treg)计数抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较较测试

示意图5 现象CD4+T肽质对很慢的发展的T肽质能还原的抑止格外敏感。SP第一组用粉红色的里央线和橘色暗示，HD第一组用黑色的里央线和橘色暗示，橘色的里央线/橘色暗示NADPHsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肽质顺利完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel记号，treg按推论的数目试样。用抗CD3 /28微珠能还原肽质，养成3天后顺利完成流式肽质忍术(CD25反染)和肽质因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同养成。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑止次之(b)。(c,d) CD25抑止次之(c)和CD134抑止次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成里的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较较测试

事实：我们算显露的事实是，来自很慢的发展子的能还原梦境CD4+Treg在GITR暗示里得到了延展和丰富，重申了进一步研究者Treg在1HG乳癌风险个纤里的关联性的全面性。

书名注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28